34.人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。
34. 【答案】
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）；   DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵；   获能（处理）  （3）显微注射法；   性别鉴定；    全能性
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

35.下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

请据图回答：
⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在        酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在         作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的        氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的         序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有         、        、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为       。
⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是                       。
35. 【答案】
（1）逆转录酶   DNA聚合酶   氨基酸   脱氧核苷酸   （2）引物  （目的基因或A基因）模板    （3）基因表达载体  （4）使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子

36.pIJ702是一种常用质粒（如下图），其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel
是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、
PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。

（1）.质粒DNA分子中的两条链靠_______键维系成双链结构。
（2）．以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb（1kb=1000对碱基）的SacⅠ/SphⅠ 片段，构成重组质粒pZHZ8。上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表4中。由此判断目的基因内部是否含有BglⅡ切割位点，并说明判断依据________________________________________  。
（3）．已知pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb，若用ClaⅠ和PstⅠ联合酶
切pZHZ8，则参照表4数据可断定酶切产物中最小片段的长度为_________kb。
（4）．不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素固体培养基上的生长状况如表5所示。若要筛选接
纳了pIJ702或pZHZ8的链霉菌细胞，所需的硫链丝菌素最小浓度应为_____μg／mL
（填写表格中给定浓度）；含有重组质粒pZHZ8的菌落呈______色。

（5）．上述目的基因来源于原核生物，其蛋白质编码序列（即编码从起始密码子到终止密码子之间的序列）经测定为1256对碱基，试判断对这段序列的测定是否存在错误：_____，并说明依据_________________________________________________________________。
36. 【答案】
（1）氢    （2）含有，据表4和题意，pIJ702上原的一个BglⅡ位点被目的基因置换后，pZHZ8仍被BglⅡ切为线状，故目的基因中必然含有一个BglⅡ位点  （3）0.3       （4）5    白
（5）错误  因为原核生物决定每个氨基酸的碱基序列为三联密码，所以基因的编码碱基序列为3的整数倍