25．（14分）ACC合成酶是乙烯合成过程中的关键酶，由ACC合成酶基因（简称A基因）控制合成。将A基因反向连接在启动子和终止子间可构成反义ACC合成酶基因（A1基因），转A1基因番茄的后熟过程变慢，利于番茄的储藏和运输。
请回答：
（1）从番茄的果肉细胞中提取RNA，利用RT﹣PCR获取A基因，即利用RNA和PCR技术获取目的基因。利用RT﹣PCR获取A基因所需要的酶主要有 。在A基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是 。
（2）S1和S2为A基因和A1基因的特异性启动子，S2在番茄果肉细胞内起作用，S1在除果肉细胞外的其他细胞内起作用。在构建转A1基因表达载体时，启动子应选择 ，不选另一个的理由是 。A1基因的表达元件包括启动子、终止子以及反向连接在两者之间的A基因，若用农杆菌转化法将此元件整合到番茄细胞的染色体DNA上，则应将此元件应构建在Ti质粒的 中。
（3）在检测番茄细胞的染色体DNA上是否插入了A1基因时， （填“能”“不能”）用放射性物质标记的A基因做探针进行检测，理由是 。检测表明，与非转基因番茄相比，转A1基因蕃茄的果肉细胞内乙烯含量下降，机理是 。
25．【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；
②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；
③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术。
④个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【解答】解：（1）利用RT﹣PCR获取A基因，包括逆转录和PCR两个过程，所需要的酶主要有逆转录酶和Taq酶。在A基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是定位A基因的位置，与模板链结合并为子链的延伸提供起点。
（2）由于S1不在果肉细胞内起作用，番茄果实不会成熟；同时S1在番茄植株细胞中起作用后会导致番茄植株的乙烯合成减少，影响番茄植株的正常生理活动；因此，在构建转A1基因表达载体时，启动子应选择S2．若用农杆菌转化法将此元件整合到番茄细胞的染色体DNA上，则应将此元件应构建在Ti质粒的T﹣DNA中。
（3）由于番茄细胞内本身无A1基因，无论是否插入A1基因都能与探针杂交形成杂交带，因此在检测番茄细胞的染色体DNA上是否插入了A1基因时，不能用放射性物质标记的A基因做探针进行检测。与非转基因番茄相比，转A1基因蕃茄的果肉细胞内乙烯含量下降，机理是转基因番茄细胞中存在A基因与A1基因，二者转录产生的mRNA能杂交形成双链，导致ACC合成酶的合成受阻，从而使乙烯的合成量降低。
故答案为：
（1）逆转录酶和Taq酶 定位A基因的位置，与模板链结合并为子链的延伸提供起点
（2）S2 S1不在果肉细胞内起作用，番茄果实不会成熟；S1在番茄植株细胞中起作用后会导致番茄植株的乙烯合成减少，影响番茄植株的正常生理活动 T﹣DNA
（3）不能 番茄细胞内本身无A1基因，无论是否插入A1基因都能与探针杂交形成杂交带
转基因番茄细胞中存在A基因与A1基因，二者转录产生的mRNA能杂交形成双链，导致ACC合成酶的合成受阻，从而使乙烯的合成量降低
【点评】本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生运用所学基础知识，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。
请回答：
（1）从番茄的果肉细胞中提取RNA，利用RT﹣PCR获取A基因，即利用RNA和PCR技术获取目的基因。利用RT﹣PCR获取A基因所需要的酶主要有 。在A基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是 。
（2）S1和S2为A基因和A1基因的特异性启动子，S2在番茄果肉细胞内起作用，S1在除果肉细胞外的其他细胞内起作用。在构建转A1基因表达载体时，启动子应选择 ，不选另一个的理由是 。A1基因的表达元件包括启动子、终止子以及反向连接在两者之间的A基因，若用农杆菌转化法将此元件整合到番茄细胞的染色体DNA上，则应将此元件应构建在Ti质粒的 中。
（3）在检测番茄细胞的染色体DNA上是否插入了A1基因时， （填“能”“不能”）用放射性物质标记的A基因做探针进行检测，理由是 。检测表明，与非转基因番茄相比，转A1基因蕃茄的果肉细胞内乙烯含量下降，机理是 。
25．【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；
②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；
③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术。
④个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【解答】解：（1）利用RT﹣PCR获取A基因，包括逆转录和PCR两个过程，所需要的酶主要有逆转录酶和Taq酶。在A基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是定位A基因的位置，与模板链结合并为子链的延伸提供起点。
（2）由于S1不在果肉细胞内起作用，番茄果实不会成熟；同时S1在番茄植株细胞中起作用后会导致番茄植株的乙烯合成减少，影响番茄植株的正常生理活动；因此，在构建转A1基因表达载体时，启动子应选择S2．若用农杆菌转化法将此元件整合到番茄细胞的染色体DNA上，则应将此元件应构建在Ti质粒的T﹣DNA中。
（3）由于番茄细胞内本身无A1基因，无论是否插入A1基因都能与探针杂交形成杂交带，因此在检测番茄细胞的染色体DNA上是否插入了A1基因时，不能用放射性物质标记的A基因做探针进行检测。与非转基因番茄相比，转A1基因蕃茄的果肉细胞内乙烯含量下降，机理是转基因番茄细胞中存在A基因与A1基因，二者转录产生的mRNA能杂交形成双链，导致ACC合成酶的合成受阻，从而使乙烯的合成量降低。
故答案为：
（1）逆转录酶和Taq酶 定位A基因的位置，与模板链结合并为子链的延伸提供起点
（2）S2 S1不在果肉细胞内起作用，番茄果实不会成熟；S1在番茄植株细胞中起作用后会导致番茄植株的乙烯合成减少，影响番茄植株的正常生理活动 T﹣DNA
（3）不能 番茄细胞内本身无A1基因，无论是否插入A1基因都能与探针杂交形成杂交带
转基因番茄细胞中存在A基因与A1基因，二者转录产生的mRNA能杂交形成双链，导致ACC合成酶的合成受阻，从而使乙烯的合成量降低
【点评】本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生运用所学基础知识，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。
